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PA0552 Rev B
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• Les échantillons, avant et après xation, et tous les matériels ayant été en contact avec eux, devraient être manipulés comme s’ils
étaient à risque infectieux et éliminés avec les précautions adéquates
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. Ne jamais pipeter les réactifs à la bouche et éviter le contact
de la peau et des muqueuses avec les réactifs ou les échantillons. Si des réactifs ou des échantillons entrent en contact avec des
zones sensibles, rincer abondamment à l’eau. Consultez un médecin.
• Renseignez-vous sur les règlements fédéraux, nationaux et locaux pour l’élimination des composés potentiellement toxiques.
• Éviter une contamination microbienne des réactifs qui peut entraîner un marquage non spécique.
• Des durées ou températures de démasquage ou d’incubation autres que celles spéciées peuvent entraîner des résultats erronés.
Tout changement doit être validé par l’utilisateur.
Mode d’emploi
L’anticorps primaire Pax-5 (1EW) a été conçu pour être utilisé sur l’automate Bond conjointement avec Bond Polymer Rene Detection.
L’utilisation de Peroxide Block comme première étape du protocole de maquage IHC Protocol F affecte le marquage obtenu avec cet
anticorps, c’est pourquoi le protocole de marquage recommandé pour Pax-5 (1EW) est une version modiée de IHC Protocol F, où
l’étape Peroxide Block avant le MARKER a été supprimée et une étape Peroxide Block insérée après le MARKER. Ce protocole de
marquage modié doit être créé par l’utilisateur. Pour des instructions sur la modication des protocoles, consultez la section “Ajout
et suppression d’étapes de protocole” dans la documentation de l’utilisateur Bond. Un démasquage d’épitope par la chaleur est
recommandé avec Bond Epitope Retrieval Solution 2 durant 20 minutes.
Résultats attendus
Tissus sains
Pax-5 est un facteur de transcription nucléaire spécique des cellules B qui s’exprime dans les cellules pro B, pré B et B matures. Le
clone 1EW a détecté la protéine Pax-5 dans les cellules B folliculaires et non folliculaires d’amygdales 3/3, de rate 3/3, de côlon 3/3
et d’intestin grêle 3/3. Le marquage occasionnel de lymphocytes B a aussi été observé dans divers autres tissus 33/69, notamment
surrénales, reins, œsophage, estomac, foie, pancréas, poumons, peau, prostate, col de l’utérus, seins, thyroïde, thymus, moelle
osseuse et hypophyse.
Tissus tumoraux
Le clone 1EW a marqué 14/14 lymphomes à grandes cellules B diffuses, 6/6 lymphomes centrofolliculaires, 3/3 MALTomes, 1/1
lymphome à cellules du manteau, 1/1 lymphome de Burkitt, 1/1 lymphome B riche en cellules T, 5/5 maladies de Hodgkin et 0/11
lymphomes à cellules T. Aucun marquage n’a été observé dans diverses malignités non hématologiques (n=41).
Pax-5 (1EW) est recommandé dans le cadre d’un panel d’anticorps pour l’identication de malignités dont l’origine est les cellules B.
Limites spéciques du produit
Le Pax-5 (1EW) a été optimisé par Leica Biosystems pour être utilisé avec Bond Polymer Rene Detection et les réactifs accessoires
Bond. Les utilisateurs qui ne respectent pas les procédures recommandées prennent la responsabilité de l’interprétation des résultats
des patients dans ces conditions. Les durées du protocole peuvent varier, en raison des variations de xation des tissus et de l’efcacité
de la facilitation de l’antigène, et doivent être déterminées empiriquement. Des contrôles réactif négatifs devraient être testés lors de
l’optimisation des conditions de démasquage et des durées du protocole.
Identication des problèmes
Voir la référence 3 pour connaître les mesures correctives.
Prenez contact avec votre distributeur local ou avec le bureau régional de Leica Biosystems pour signaler tout marquage inattendu.
Informations complémentaires
Des informations complémentaires sur l’immunomarquage avec les réactifs Bond, les principes de la méthode, le matériel nécessaire, la
préparation des échantillons, le contrôle qualité, les vérications d’analyse, l’interprétation du marquage, les légendes et symboles sur
les étiquettes et les limites générales, peuvent être obtenues dans “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond.
Bibliographie
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and
T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.
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950 est une marque commerciale de Supelco, membre du groupe Sigma-Aldrich Corporation.
Date de publication
05 février 2013